곤충세포에서 사람 파필로마바이러스 18형 Ll 재조합 단백질의 생산 및 바이러스 유사 입자 분리
Production of Viruslike particles(VLPs) from Human Papillomavirus Type 18 Capsid Protein Ll Expressed in Insect Cells
소속 상세정보
진승원
한미영/이홍수/송은영/유동주/권두한/박순희/강병태/노갑수
KMID : 0357119950170040337
Abstract
HPV 18Ll 과 HPV 18L1Δ 단백질의 발현을 위해 baculovirus발현체계를 사용하여 클로
닝 및 발현 실험을 수행하였다. HPV 18Ll 전체 ORF와 두번째 ATG codon을 전사개시점으
로 사용한 ORF를 PCR로 증폭하여 AcMNPV 유래의 polyhedrin promoter하부에 클로닝시
켜 곤충세포인 Sf-21에 transfection시켜 재조합 바이러스를 분리하고 이들을 SF-21곤충세
포에 다시 감염시켰다. 곤충세포에서 생산된 단백질들을 SDS-PAGE로 분석하였을 때는 뚜
렷한 재조합단백질 밴드를 확인할 수 없었으나 HPV 16Ll monoclonal antibody를 사용한
Western blot 분석에서는 명확히 확인할 수 있었다. HPV 18Ll 과 HPV18L1Δ 단백질 간의
발현양의 차이는 없었으며, 발현된 재조합단백질은 HPV형이 다른 HPV 6b Ll polyclonal
antibody에 대한 교차 반응성은 없었다. 40% sucrose cushion 과 27% CsCl 구배를 이용한
초원심분리로 바이러스 유사입자(VLP) 형 성능을 검정하고자 하였으며 분리한 분획을 전자
현미경으로 관찰한 결과 수율이 높지는 않지만 18형 Ll 만으로 이루어진 VLP가 생성되었음
을 확인할 수 있었다.
#초록#
The Ll capsid proteins of Human Papillomavirus type 18(HPV 18) were expressed in
Sf-21 insect cells via a baculovirus vector. The DNA fragment coding Ll full length
open reading frame(Ll ORF) or one deleted in amino terminal segment to the second
methionine(Ll Δ ORF) was cloned into pBacPAKl transfer vector, respectively.
Recombinant viruses were isolated for both Ll and Ll Δ. From insect cells infected with
either of these two recombinant viruses, recombinant proteins were produced and
confirmed by 10% SDS-PAGE followed by Westem blotting. The apparent molecular
weight of Ll polypeptide and Ll Δ polypeptide was approximately 63kd and 57Kd,
respectively. These proteins were detected by HPV 16Ll monoclonal antibody but not by
HPV 6b Ll antibody. This result indicates that the major capsid protein of HPV 18Ll is
antigenically similar to HPV 16Ll but different to the HPV 6b Ll. Recombinant Ll major
capsid protein was shown to be assembled into viruslike particles(VLPs) by purifying on
sucrose and CsCl gradient ultracentrifugation, and by confirming VLP structure using
electron microscopy. This demonstrates that Ll protein alone is sufficient for viruslike
particle assembly.
키워드
Human Papillomavirus type18; Ll capsid protein; VLP; insect cell.;
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