방광이행상피세포암에서 p53유전자의 변화
Altered Expressions and Point Mutations of p53 in Human Bladder Transitional Cell Carcinomas
소속 상세정보
김법완/Bup Wan Kim
권태균/노기석/정성광/장세국/정운복/김정완/Tae Gyun Kwon/Ki Suck Noh/Sung Kwang Chung/Sae Kook Chang/Woon Bok Chung/Jung Wan Kim
KMID : 0358319970380080814
Abstract
결론
25례의 방광이행상피세포암 환자를 대상으로 IHC를 실시하여 방광암의 악성도에 따른
p53 단백의 과발현을 조사하고 p53 유전자의 conserved exon(exon 5-8)에 대한 PCR-SSCP
분석과 염기서열분석을 실시하여 돌연변이를 조사하였다.
IHC 결과 20례중 15례(75%)에서 p53 단백의 과발현이 관찰되었고 종양의 악성도가 증가
할수록 p53단백의 발현도 강하게 나타나 p53 단백의 발현강도와 악성도 사이에 상관성이
있음을 알 수 있었다.
PCR-SSCP에서는 25명중 10명 (40%)에서 13례의 이상 band 이동이 관찰되었고 이중 8
례 (62%)가 exon 8에서 band 이동에 이상이 발견되어 이 부위에서 돌연변이가 가장 빈발하
는 것으로 나타났다.
염기서열분석 결과 PCR-SSCP상에서 band 이동에 이상을 보인 시료 모두에서 핵산염기
의 변화가 확인되었는데 모두가 점돌연변이였고 그 중 10례가 G:C→A:T transition이었다.
유전자변이가 일어난 10례중 3례는 codon 285에서 GAG (Glu)가 AAG (Lys)으로, 2례는
codon 280에서 AGA(Arg)가 AAA (Lys)으로 변경되어 이 부위가 hot spot으로 나타났다.
두 검사의 병행을 통한 방광이행상피 세포암의 확인율을 보면 20명중 17명 (80.5%)에서
최소한한 검사에서 양성을 보였는데 grade Ⅱ에서는 4례 중 2례, grade Ⅲ에서는 9례 중 8
례, grade Ⅳ에서는 조사한 7명 모두가 양성을 보여 grade가 높을수록 두 검사중 하나에서
양성을 보일 확률이 높게 나타났다.
이상의 결과로 방광암환자에서 면역조직화학 검사와 분자생물학적 방법(PCR-SSCP, 염기
서열 분석 등)을 함께 시행할 경우 종양의 진단 및 예후판정에 도움이 되리라 생각된다.
#초록#
The objective of this study was to characterise the pattern of p53 mutations in
bladder tumor. In this study, 25 bladder transitional cell carcinomas were analyzed by
immunohistochemistry (IHC) for p53 nuclear overexpression, and the results were
compared with those of polymerase chain reaction-single strand conformational
polymorphism (PCR-SSCP) analysis in exon 5-8 of the p53 gene and DNA sequencing
analysis. 15 out of 20 cases (75%) showed p53 nuclear immunoreactivities on IHC. On
PCR-SSCP analysis, 10 out of 25 cases (40%) had abnormal shifts in mobility. 62% of
the mutations were in exon 8. Direct DNA sequencing analysis were performed in these
10 cases to confirm the presence of mutated p53 genes and to determine the type of
mutations. Sixteen point mutations were detected in 10 cases. Two specimens had
double mutations and another two had triple mutations. G:C→A:T transitions were the
most frequent patterns (62.5%). One mutation was a premature stop codon and two
were silent mutations. Three out of 10 had a point mutation at codon 285 (GAG/Glu→
AAG/Lys) and two had at codon 280 (AGA/Arg→AAA/Lys). One of 16 mutations was
transition at hot spot codon 273 with CpG site.
These results suggest that altered expressions and point mutations of p53 occured in
all grade of bladder cancer, but are more associated with high grade bladder tumors. To
elucidate the carcinogenesis of bladder cancer, further studies should be carried out.
키워드
Bladder tumor; p53; Immunohisochemistry; PCR-SSCP analysis;
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