염색체 미세해부에 의한 신세포암 세포주 Caki-1의 표지 염색체 분석
Analysis of Marker Chromosomes in Renal Cell Carcinoma Cell Line Caki-1 by Chromosome Microdissection
소속 상세정보
신재섭/Jae-Seop Shin
박수연/전용혁/박선화/Soo-Yeun Park/Yong-Hyuck Chun/Sun-Hwa Park
KMID : 0358319980390030205
Abstract
결론
종양에서 흔히 보이는 염색체 이상에 대한 세포유전학적 분석은 많은 질병의 진단과 예후
를 판단하는데 중요한 부분이 되었고, 분자 수준의 분석은 종양의 병리기전과 관련된 유전
자의 규명을 용이하게 하고 있다. 그러나 고형암에서 보이는 많은 표지 염색체들의 변이를
규명할 수 없는 경우가 대부분이다.
본 연구는 특정염색체 이상과 관련이 많다고 보고된 신장암에서 유래한 세포주 Caki-1을
핵형분석한 후 기원을 알 수 없는 염색체 부위를 미세해부하여 probe pool을 만든 후 이를
페인팅 probe로 하여 FISH방법으로 그 절단부위와 변이된 염색체의 기원을 분석하고자 하
였으며 CURC-II에 적용하여 표지염색체를 비교하였다.
Caki-1의 표지염색체인 9q+와 유래를 알 수 없는 표지염색체를 미세해부한 후
Topolsornejase와 T7 DNA polymerase를 사용한 PCR 방법으로 염색체 DNA 증폭을 얻었
다. 증폭된 DNA 산물을 biotin으로 표지하여 형광 in situ hybridization법을 이용하여 페인
팅한 결과 미세해부된 염색체부위에 결합되어 적절한 페인팅 probe 제작을 확인하였고, 정
상 염색체에 결합시킨 결과 그 유래한 염색체부위를 규명할 수 있었다. 9q+는
t(9;17)(q34;q21)였고, 유래를 알 수 없었던 표지염색체는 t(15;20)로 밝혀졌다. 이들 probe를
CURC-II에 적용하여 비교분석한 결과 t(9,17), der(1;17)(q10;q10), t(15;20), t(?;15),
der(1,20), t(14;19) 표지염색체가 동일하게 발견되어 그 전위된 염색체부위가 신세포암과 밀
접한 관련성이 있음을 추측하게 하였다.
그러므로 이상의 방법은 분석이 곤란한 표지염색체에 적용되어 그 기원을 분석하는데 유용
하게 쓰일 수 있으며, 제작된 페인팅 probe는 신세포암에 적용되어 유사한 표지염색체를 구
분하는데 이용될 뿐 아니라 probe pools은 아직 알려지지 않은 암과 관련된 새로운 유전자
를 규명하는 데에도 이용될 수 있을 것이다.
#초록#
Purpose : The analysis of recurring chromosome aberrations has become an integral
part of the diagnostic and prognostic workup of many human cancers, and their
molecular analyses have facilitated the identification of genes related to the pathogenesis
of cancer But the technical limitation of conventional cytogenetic method makes unable
us to characterize all recognizable chromosome rearrangements. The generation of
chromosome region specific painting probe by PCR amplification of microdissected
chromosomal DNA has proven extremely useful in identification of chromosomal
derivation for marker chromosomes which are indeterminable by routine chromosome
banding analysis. In this study we have constructed and analyzed the band-specific
painting probe for unidentified marker chromosomes of renal cell carcinoma cell line,
Caki-1 to determine the derivative chromosomes and the painting probes applied to
CURC-II to compare the marker chromosomes.
Materials and Methods: Microdissection was performed on 9q+ and unidentified one of
Caki-1, and chromosomal BNAs were amplified by PCR using topoisomerase I and T7
DNA polymerase. Fluorescent in situ hybridization was conducted with biotin labeled
PCR products to normal, Caki-1 and CURC- II metaphase chromosomes.
Results: With this method, it was possible to construct the band-specific painting
probes for markers and the probes hybridized specifically to the dissected regions and
derivative chromosomes. The 9q+ and unidentified one were identified as t(9;17)(q34;q21)
and t(15;20) respectively. The marker chromosomes - t(9;I 7), der(1 ;17)(ql0;q10),
t(15;20), t(?;15), der(1 ;20), t(14;89) were examined same in Caki-1 and CURC-II.
Conclusions: Thus this methodological advance significantly extends the limits of
conventional cytogenetic analysis by enabling the analysis of unknown chromosome
regions, and these painting probes can be applied to detect the similar marker
chromosomes in renal cell carcinoma, and the probe pools for markeys may be used to
identify the cancer-relevant genes.
키워드
Caki-I; CURC-II; Marker chromosome; Chromosome microdissection; Fluorescent in situ hybridization;
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