레트로바이러스를 이용한 Interleulkin-2 유전자의 인체 신세포암 세포주내 형질이입
Retroviral Vector-mediated Interleukin-2 Gene Transfer into Human Renal Cell Carcinoma Cell Line
소속 상세정보
정병하/Byung Ha Chung
이동현/홍성준/Dong Hyeon Lee/Sung Joon Hong
KMID : 0358319980390050418
Abstract
서론
신세포암은 비교적 흔한 비뇨기과적 종양으로 진단시 약 20%에서 원격전이가 있으며 이
런 경우 3년 생존율이 6%로 예후가 극히 좋지 않아 효과적인 치료가 절실히 요구되고 있다
'최근 원격전이가 있는 신세포암의 치료에 Interleukin-2(IL-2)나 Interferon(IFN) 등을 이용
한 면역요법이 널리 이용되고 있으나 치료용량의 cytokine을 투여할 때 나타나는 심한 전신
부작용으로 치료에 큰 제한을 받고 있다. 이러한 전신부작용을 줄이기 위하여 저용량 투여
법이나 종양에 직접 투여하는 방법 등이 보고되고 있으나 현실적으로 적용에 한계가 있다.
만일 종양세포에 직접 IL-2를 지속적으로 분비한다면 전신부작용을 최소화하면서 종양
에 대한 면역치료의 효과를 극대화시킬 수 있어 신세포암의 치료에 좋은 방법이 될 수 있을
것이다. 이에 Gastl 등은 IL-2유전자를 종양세포에 형질 이입시켜 종양세포에서 IL-2 분비
를 실험 적으로 유도한 바 있으나 국내에서는 이러한 보고가 거의 없는 실정이다. 최근 분
자생물학의 눈부신 발전으로 유전자요법이 암 치료의 새로운 치료법으로 등장하였다. 초기
의 유전자 치료법은 선천성 유전질환을 대상으로 모색되었으나 최근의 유전자 치료의 방향
은 대부분이 종양치료에 응용되고 있으며 이들 중에서 IL-2와 같은 cytokine을 이 용한 연
구가 가장 활발히 진행되고 있다. 이러한 연구에 이용되는 유전자의 형질 이입 시 레트로
바이러스를 이용한 유전자이입(retroviral-mediated gene transfer)은 특정유전자를 포유세포
에 이입시키는 효과적인 방법으로 최근 많이 이용되고 있는데 이들은 자체의 역전사 효소를
이용하여 숙주세포 genome으로의 안정적 통합을 유도하고 유입 유전자 내에 존재하는 특정
단백질을 code하는 유전자가 지속적으로 발현되게 한다는 장점이 있기 때문이다. 본 연구에
서는 인체 신세포암 세포주에 레트로바이러스를 이용한 H.-2 유전자 이입 후 암세포로부터
생성되는 K.-2의 양을 측정함으로서 전이 신세포암에 대한 종양백신 치료법의 가능성에 대
하여 알아보고자 하였다.
#초록#
Purpose : The therapeutic dose of cytokine for patients with advanced renal cell
carcinoma is very high and leads to toxic side effects and a substantial cost to the
patients. Interleukin-2(IL-2) could be released continuously and slowly in the host by
genetic engineering of IL-2 genes and increase host immunity with decreasing the aㅂ
verse effects of the drug. We investigated the IL-2 gene expression, amplification of
viral titer, and transduction of IL-2 gene into human renal cell carcinoma cell line with
retroviral vectors.
Materials and Methods: For the production of retroviral vectors with the IL-2 gene,
we used PA-317 as a packaging cell and Caki-2 as a renal cell carcinoma cell.
Retroviral supernatants were added to culture flask containing Caki-2 cells and after 48
hours, re- placement with a media containing G418(Gibco, Grand Island, NY) 800μg/m1
was done for selection of transfected colonies. The selected colonies were cultured and
then measured the amount of IL-2 production per 1 l06 for 24 hours
using an ELISA assay kit(BioSource International, USA) for IL-2.
Results: Thirteen colonies were selected and the amount of IL-2 production was 143.1
±75.3pg/m1/106 cells/24hr(range: 51.5-370.7).
Conclusions: The success of transduction of the IL-2 gene into human renal cell
carcinoma cell lines with a retroviral vector will give a possibility in gene therapy for
advanced renal cell carcinoma and may have promising results
(Korean J Urol 1998; 39: 418∼22)
키워드
Renal cell carcinoma; Retroviral vector; Interleukin-2; Gen8 transduction;
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