p21/WAFl 유전자의 전달이 인체 신장암과 방광암 세포주에 미치는 영향에 대한 연구
The Effect of Transfer of p21/WAF1 Gene on Kidney and Bladder Cancer Cell Lines
방장호, 김용규,
소속 상세정보
방장호 ( )
중앙대학교 대학원 간호학과
김용규 ( )
중앙대학교 의과대학 비뇨기과학교실
KMID : 0358319990400020175
Abstract
결론
인체의 신장암(CURC1, CURC2)과 방광암(T24, RT4) 및 간암(Hep3b, HepG2) 세포주를
대상으로 p21/WAF1 유전자를 투여하여 그 항암효과와 작용기전을 연구하였다. 인체폐암세
포주로부터 RT-PCR방법을 이용하여 인체의 정상 P21/WAF1유전자의 전체 cDNA를
cloning하였으며, 이를 pCMV 플라스미드에 삽입하여 pCMV-p21벡터를 합성하였으며 이를
HDL양이온성 리포솜과 결합하여 각 세포주에 투여하여, 생존세포수를 측정하고 p21/WAF1
의 발현을 RT-PCR로 검색하였으며, 세포주기의 변화와 고사발생 여부를 연구하였다. 그
결과 1) pCMV플라스미 드와 HDL의 결합체가 유전자 전달 및 발현 효율이 뛰어남을 확인
하였고, 2) p53의 돌연변이는 p21/WAFl의 발현과 깊은 연관이 있으며, p53의 돌연변이가
없는 암세포주에서는 p21/WAF1가 발현되나 p53의 돌연변이가 있을 때는 p21/WAF1의 발
현이 현저히 감소되어 있음을 알 수 있었으며, 3) p21/WAF1 유전자 치료는 p53의 돌연변
이 여부나 무처치 상태에서의 p21/WAFl발현 정도와 상관없이 신장암과 방광암세포 및 간
암세포에 대해 모두 유의하게 증식을 억제함을 확인하였고, 4) p21/WAF1 유전자투여가 신
장암과 방광암세포에 고사를 유발함을 발견하여, p21/WAF1 유전자가 암세포주기의 진행을
억제하므로서 증식을 억제한다는 기존의 학설에 추가로 고사를 유발하는 기능도 있음을 알
수 있었다.
Purpose : To identify antitumor effect, indication and antitumor mechanism of
p21/WAF1 gene therapy in human kidney and bladder cancer.
Materials and Methods : We cloned cDNA of wild type human p21 gene by reverse
transcription-polymerase chain reaction(RT-PCR) technology and constructed a
mammalian expression plasmid vector carrying cDNA of wild type human p21 and CMV
enhancer/promotor(pCMV-p2l). pCMV-p2l was administered in vitro in complex with
HDL cationic polyliposome into human kidney cancer cells(CURC-1 and CURC-2),
bladder cancer cells(RT4 and T24), and liver cancer cells(Hep3B and HepG2), followed
by analysis of viable cell number, cellular morphology, cell cycle distribution and
development of apoptosis.
Results : The expression of p21 was preserved in p53-wild type cells and markedly
decreased or absent in p53-mutant cells. Administration of pCMV-p21 :HDL complex
induced high level expression of p21 and significant suppression of growth in all of the
cancer cells examined, regardless of their genetic status of p21 and p53. Transfer of p21
to cancer cells induced not only decrease of proportion of cells in G2+M/S phase but
also apoptosis.
Conclusions : HDL cationic polyliposome-mediated p21 gene transfer may become a
promising therapeutic modality for human kidney and bladder cancer and that p21 may
have a novel function to induce apoptosis to human bladder and kidney cancer cells.
Further studies are necessary on in vivo antitumor effect of p21 gene transfer and
molecular mechanism of p21 gene-induced apoptosis.
키워드
p21/WAF1; Gene transfer; Kidney cancer; Bladder cancer;
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