토끼에서 NO합성억제제 투여에 의한 자간전증의 유발과 고용량의 L-arginine투여에 의한 역전실험
Experimental animal model for preeclampsia by the infusion of nitric oxide synthase inhibitor and reverse of preeclampsia by high dose L-arginine infusion
이형근, 이종건, 유영옥, 정대영, 박동춘, 김재훈, 신종철,
소속 상세정보
이형근 ( )
가톨릭대학교 의과대학 산부인과학교실
이종건 ( )
가톨릭대학교 의과대학 산부인과학교실
유영옥 ( )
가톨릭대학교 의과대학 산부인과학교실
정대영 ( )
가톨릭대학교 의과대학 산부인과학교실
박동춘 ( )
가톨릭대학교 의과대학 산부인과학교실
김재훈 ( )
가톨릭대학교 의과대학 산부인과학교실
신종철 ( )
가톨릭대학교 의과대학 산부인과학교실
KMID : 0358419990420122768
Abstract
연구배경: 자궁태반 허혈증이 임신성 고혈압의 발병기전이라는 가설하에 실험동물에서 대동맥 또는 자궁동맥을 부분결찰 하는 방법으로 태반허혈증을 일으켜 임신성고혈압을 유발하는 실험이 과거에 널리 행해졌으나, 최근에는 혈관내피 기능장애설을 근거로 하여 혈관 내피세포 에서 Nitric Oxide(NO)합성을 저해하는 NO합성억제제를 이용하여 동물에서 임신성고혈압을 발병시켜 실험모델도 만들려는 시도가 있다.
연구목적: 토끼에서 arginine 유사체인 L-nitro-arginine methyl ester(L-NAME)을 이용하여 NO합성을 억제함으로써 자간전증 증후군의 실험동물 모델을 만들 수 있는지를 알아보고 다시 고용량의 arginine투여가 이 증후군을 역전시킬 수 있는지를 알아보기 위하여 실험에 착수하였다.
방법 및 재료: 재태기간 22 일부터 임신중인 토끼 10마리에 L-NAME 400㎎을 7일동안 매일 피하주사하였다(실험 제 1군). 다른군 10마리 에서는 L-NAME 투여 30분 후에 체중 ㎏당 100㎎의 L-arginine은 정맥주사 하였다(실험 제2군). 동일한 재태일의 토끼에 같은 용적의 생리식염수를 피하주사하여 대조군으로 하였다. 혈압측정은 대퇴동맥을 혈관절개하여 22 번 혈관침을 삽입 한 후 눈금혈압계에 도관을 연결하여 식염수로 0점을 맞춘후 동맥혈압을 측정하였다. 혈액 채취는 토끼의 귀정맥에서 하였고 뇨 채취는 넬라톤카테터를 이용하였다. 약물투여 7일후에 새끼를 분만 시켰고 분만 즉시 어미토끼의 폐, 간, 신장, 태반을 적출하여 포르말린액에 고정하였고 신장은 전자현미경고정액으로 고정하였다.
결과: 평균동맥압은 실험제1군에서 대조군에 비하여 유의있게 높았으나(P<0.O5), 실험 제2군에서는 대조군에 비해서 의의있는 차이는 없었다. 단백뇨, BUN, 크레아티닌, 간효소치, LDH값, 혈소판수치는 실험제1군에서 대조군에 비하여 유의있기 높았으며(P<0.05), 실험 제2군에서는 대조군에 비해서 의의있는 차이를 보이지않았다. 반면, 뇨산값은 실험제1군과 실험제2군에서 모두 대조군에비하여 의의있는 차이를 보이지 않았다.
조직검사 소견에서는 광학현미경소견상, 실험군의 폐, 간, 신장, 태반에서는 특이한 소견을 보였으며, 신장의 전자현미경소견에서는 실험제1군에서도 사구체의 ㅁ세구조가 비교적 잘 보존되었다. 신장의 간질은 간질기질의 증식으로 넓어져 있었다. 그리고 경증의 족양돌기소실이 보였으며 근위뇨세관 세포질내 전자밀도수초모양의 구조물을 포함하고 있는 것이 관찰되었다.
결론: 장기간의 L-arginine유사체(L-NAME)의 투여는 임신토끼에서 자간전증과 유사한 임상양상과 장기의 조직병리소견을 유발하였으며 고용량의 L-arginine의 동시 투여는 이와 같은 변화를 역전시켰다.
Objectives: To learn which inhibition of nitric oxide synthase with L-nitro arginine methylester(L-NAME) induces a preeclampsia-like syndrome in pregnant rabbits and high dose of L-arginine reverse the adverse changes induced by nitric oxide synthesis inhibition in pregnant rabbits.
Material and Method: Twenty Newzealand rabbits with 22-days of gestation were injected subcutaneously with 400mg of L-NAME for Mays and 100mg/kg L-arginine was also given intravenously 10 of 20 L-NAME injected pregnant rabbits. They are compared with the control group in which same volume of saline was subcutaneously injected to 5 rabbits with same condition.
They were anesthesized by ketamine 50 mg/kg and roupum 2 mg/kg intramuscularly. Cutdown of femoral artery was performed and 22 gauge angioneedle was inserted. On manometer,three way catheter was connected, zeroed with saline, and blood pressure was read. Blood samples were taken from the vein of ear and checked for count of blood cells and bood chemistry (BUN/Cr, GOT/GPT, LDH, Uric acid). Urine protein was measured with nelatori-catheterized urine. We injected drugs for 7 days begining on 22 days after mating and performed cesarian section to deliver fetus. To observe their effects on organs, lung, liver, placenta and kidney. were taken and fixed with formalin. The sliced kidney tissue in thickness of 1 mm, was fixed with glutaraldehyde for electron microscopy and stored at 4t. Special staining was done for closed observation of pattern changes. For statistical analysis, mean ±SEM was used. The control and experimental groups were compared by unpaired t-test and the differences were significant if probability level is less than 0.05(<0.05).
Result: Mean blood pressure(MAP) in the experimental group I was significantly high compared to the control group(P<0.05). There was no significant differences in MAP between experimental group II and control group. Urine Protein, BUN, Cr, GOT/GPT, LDH, platelet count in the experimental group I was significantly high(P<0.05) compared to the control group. There was no significant difference between experimental group II and control group. In light microscopic examination, lung, liver, kidney, placenta showed specific finding in experimental group I. Misconstructive of glomerulus in the experimental kidney was well preserved under EM examination. Interstitium of kidney was widened by increase of mesangial matrix. Mild effacement of foot process and cytoplasm of proximal tubule containing electron dense myelin figure like structure were observed. Conclusion: Long term injection of L-arginine analogue produced preeclampsia like syndrome and pathologic changes of organ system in pregnant rabbits. Concurrent high dose of L-arginine reversed such chages.
키워드
자간전증;L-NAME;L-arginine;Preeclampsia
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