공배양이 생쥐 난자의 체외수정 및 초기배아의 발달에 미치는 영향
The Effect of Coculture on In Vitro Fertilization of Cocytes and Development of Early Stage Embryos in Mice
김향미, 손영수,
소속 상세정보
김향미 ( )
가천의과대학 산부인과학교실
손영수 ( )
가천의과대학 산부인과학교실
KMID : 0358419990420122792
Abstract
목적: 생쥐 난자의 체외수정시, 체외수정후 초기 2-세포기 배아의 성장발달, 체내수정된 초기 2-세포기 배아의 체외에서의 성장발달에 미치는 공배양의 효과에 대하여 비교 관찰함으로써 공배양이 어떤 시점에서 어떤 양상으로 체외수정프로그램에 영향을 미치는지 알아보고자 하였다.
연구방법: 4-6주령의 제 1대 잡종 생쥐(C57BL × CBA)를 과배란 유도후 획득한 난자와 정자의 체외수정을 실시함에 있어서 체외수정시, 체외수정후에 얻은 초기 2-세포기 배아, 체내수정된 후 얻은 초기 2-세포기 배아의 배양시 배양액내에 공배양을 실시하지 않는 군(대조군), Vero 세포로 공배양한 군, 사람의 양막세포로 공배양한 군으로 나누어 체외성장 발달을 120시간후 관찰하였다. 결과의 통계적 유의성은 chi-검증을 이용하였다.
결과: 체외수정당시 공배양의 효과는 대조군, Vero 세포로 공배양한 군, 양막세포로 공배양한 군을 비교할 때 수정률은 대조군이 공배양한 군 보다 유의하게 높았으며, 120시간후 배아의 성장발달은 세군간에 각각 유의한 차이가 없었다. 체외수정후 얻은 초기 2-세포기 배아의 성장발달을 관찰한 결과 대조군과 공배양한 두 군 사이에 유의한 차이가 없었다. 체내수정후 얻은 초기 2-세포기 배아의 성장발달을 관찰한 결과 포배기 배아로의 발달은 대조군과 두 공배양한 두군 사이에 유의한 차이가 없었다.그러나 부화배반포로의 발달은 공배양한 두 군이 대조군보다 유의하게 높았다.
결론: 생쥐난자를 처음부터 체외에서 수정 및 발육시키는 경우 배아의 성장발달은 배아 외부의 환경에 대한 의존성은 그다지 크지 않은 것으로 보인다. 즉 체외수정된 배아에 있어서는 생리적 환경조성을 위한 공배양에 의한 배아성장발달의 촉진 효과보다는 수정난자체의 어떤 세포내 기전 등의 내부인자에 의해 성장이 주도되는 것으로 생각된다. 체외수정된 배아에서 성장을 주도하는 내부인자에 대한 규명을 위해서는 향후 많은 연구가 필요할 것으로 생각한다.
Objectives: Our objective was to investigate the effect of coculture system on in vitro fertilization and development of mice embryos.
Methods: FI hybrid mice were superovulated with PMSG/hCG. Recruited oocytes were divided into three subgroups which are control(subgroup a), Vero cell coculture(subgroup b) and human amniocyte coculture subgroup (subgroup c) respectively. For 3 subgroups, we observed fertilization after 24 hours of incubation.
In vitro fertilized early 2-cell stage embryos were allocated to Group I and in vivo fertilized early 2-cell stage embryos were allocated to Group II. Also, each group was divided into control (subgroup a), Vero cell coculture(subgroup b) and human amniocyte coculture subgroup(subgroup c) respectively. For 6 subgroups, we observed in vitro development to blastocyst and that to hatching blastocyst after 120 hours of incubation.
Results: As to recruited oocytes, the in vitro fatilization rate of subgroup a was significantly higher than that of subgroup b and subgroup c (p<0.05). In Group I, the developmental rates were not significantly different between the three subgroups. But in Group II, the developmental rates to hatching blastocysts of subgroup b and c were significantly higher than that of subgroup a (p<0.05).
Conclusion: The development of the in vitro fertilized mouse embryos seemed to be independent of physiologic condition which we think coculture system may give to the embryos. The independent developmental capability of the in vitro fertilized embryos might be obtained through a certain intracellular mechanism for which there should be the need of many more investigations to be verified.
키워드
공배양;Vero 세포;생쥐배아;coculture;in vitro fertilization;mouse embryos;Vero cell
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