백서 뇌하수체 전엽세포에 미치는 Nitric Oxide Synthase의 영향에 관한 실험적 연구
An Experimental Study of Effects of Nitric Oxide Synthase on Rat Anterior Pituitary Gland
소속 상세정보
이호국/Ho Kook Lee
황도윤/김윤화/박용구/양문호/Do Yun Hwang/Youn Wha Kim/Yong Koo Park/Moon Ho Yang
KMID : 0359819990280091264
Abstract
결론
본 연구의 목적은 백서의 뇌하수체에서 NOS가 존재하는 세포 및 성장호르몬에 미치는
영향을 알아보기 위하여 본 연구를 시행하였다. 실험방법은 성장기의 백서에 산화질소 공여
물질인 sodium nitroprusside와 s-nitro-acetyl-penicillamine, 그리고 nitric oxide
synthase(NOS)의 일반적인 억제제인 N-mono-methylamine과 iNOS의 억제제인
aminoguanidine을 투여하고 뇌하수체에서의 성장호르몬의 변화를 혈청에서 방사선 면역분
석법을 이용하여 측정하고 아울러 NOS에 대한 면역조직화학적 염색을 시행하였다. 또한,
뇌하수체에서 mRNA를 분리하고 NOS에 대한 역전사 중합효소 연쇄반응을 이용하여 분자
생물학적으로 NOS가 각각의 실험군에서 변화하는 것을 관찰하여 다음의 결론을 얻었다.
1) 생리식염수만을 투여한 대조군에서 혈청내 성장호르몬은 4.0±0.58ng/㎖l이었으나 산화
질소공여물질을 투여한 군들간에서는 차이가 없었고 NOS에 대한 억제제인 L-NA-ME를
투여했을 때는 32.0±10.82ng/㎖, 그리고 aminoguanidine을 투여한 경우는 31.67±11.29ng/㎖
로 혈청내 성장호르몬의 양이 통계학적으로 유의하게 증가하였다.
2) NOS에 대한 면역조직화학적 염색에서 정상대조군에서는 뇌하수체 전업에서 대다수의
소포성상세포에서 강하게 양성으로 염색되었을 뿐만 아니라 소수의 전염세포에서도 일부 약
하게 염색되었으나 산화질소 공여물질을 투여한 군이나 NOS 억제제를 투여한 군에서는 염
색정도의 차이를 볼 수 없었다.
3) iNOS에 대한 역전사 중합효소 연쇄반응을 시행한 결과 대조군에 비해서 대부분의 실
험군에서는 차이가 없었으나 aminoguanidine을 투여한 실험군에서만 222 base pair에서
mRNA가 더 강하게 발현되었다.
그러므로 이상의 소견으로 미루어 보아 NOS를 억제할 때 혈청내 성장호르몬이 증가하는
것을 알 수 있었으나 대조군에 비해 NOS에 대한 면역조직화학적 염색상 차이를 관찰하지
못한 점과 iNOS에 대한 역전사 중합효소 연쇄반응에서 일부 NOS 억제제를 투여한 군에서
mRNA가 강하게 나타난 것으로 보아 성장호르몬 분비의 정확한 기전은 밝히지 못하였으나
NOS가 뇌하수체의 성장호르몬을 조절하는 작용에 관여하고 있음은 알 수 있었다.
#초록#
Objective : The nitric oxide synthases(NOS) are a group of isoenzymes that convert
L-arginine to L-citrulline and generate nitric oxide(NO). The constitutive form of NOS
is present in endothelium. adrenal gland, brain, and platelets, while the inducible form of
NOS is present in macrophages, hepatocytes. vascular smooth muscle cell and
endothelial cells. To determine whether NO has a role in anterior pituitary call function,
immunohistochemistry and molecular techniques tiers used to study NOS expression in
rat pituitary gland.
Materials and Methods : We treated the Fats with two NOS inhibitors :
N-mono-methyl amine(NMMA). Which is an inhibitor e」 NOS activity anti
aminoguanidine. which a selective inhibitor Of the inducible NOS isoform anti two NO
donors ; sodium nitroprusside(SNP), s-nitro-acetyl-penicillamine(SNAP) as we11 as
L-arginine. Rat growth hormone was measured in the serum using radioimmunoassay
and NOS producing cells in the anterior lobe of the pituitary was detected by
immunohistochemical stains. Also mRNA was extracted from the pituitary and performed
RT-PCR using inducible NOS primer.
Results : Serum growth hormone levels were increased significantly by administration
of NOS inhibitors, such as NMMA and aminoguanidins. Immunohistochemical stains for
neuronal and inducible NOS showed strong positivity in the folliculostellate cells and
weak positivity in the anterior pituitary cells in the control and various experimental
groups. RT-PCR in inducible NOS showed more brighter band in the 222 base pairs in
the aminoguanidine treated group than normal control group.
Conclusion : These data suggest that pituitary NOS may play a pivotal role in the
control of growth hormone secretion.
키워드
Nitric oxide synthase; Pituitary; Immunohistochemistry; RT-PCR; Rat;
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