Etoposide (VP-16)와 Tenipocide (VM-26)의 In Vitro 세포독성에 대한 세포외액의 단백 농도가 미치는 영향
Effect of Extracellular Protein Concentration on the In Vitro Cellular Uptake and Cytotoxicity of Etoposide (VP-16) and Teniposide(VM-26)
대한암학회지 1989년 21권 2호 p.262 ~ 268
Choi Kyung-E.,
소속 상세정보
( Choi Kyung-E. )
Cheil R & D Center Department of Pharmacology
KMID : 0360319890210020262
Abstract
5-10% 우혈청을 첨가하거나 첨가하지 않은 완충 수용액 혹은 세포 배양액에서 약물에대한 세포의 노출 정도를 측정하는 것이 In vitro 세포내 약물의 유입, 유출 및 세포독성을 측정하는 전형적 방법이다. 단백 결합율이상다히 높은 (95-99%)항암제인 VP-16과 VM-26의 In vitro 약물유입, 평형시의 세포내 농도, 그리고 세포 독성에 대한 생리적 알부민 농도(40-50mg/ml)의 영향을 조사하였다. ³H-VP-16과 ³H-VM-26의 세포내 유입, 평형농도, In vitro 세포독성(CCRF-CEM을 사용)을 다음과 같은 세가지 종류의 배양액을 사용하여 측정하였다.
A배양액=단순한 RPMI
B배양액=fetal calf serum 첨가한(10% v/v)RPMI
C배양액=인혈청 알부민 첨가한(최종 알부민 농도는 5g/dl혹은 50mg/ml)RPMI
In vitro 단백결합율은 Ultrafiltration방법으로, 세포대사는 세포 pellet의 HPLC분석법으로, 세포축적(초기유입 속도와 평형 농도)은 실리콘oil을 통한 원심분리법으로 측정하였다. 세포독성은 남아있는 세포로부터 약물과 배양액을 씻어내고, B배양액에 1×10^5cell/ml농도로 재혀탁시켜 3일간 37℃ 5% CO₂하에 배양하여 매일 세포의 수와 생존율(trypan blue exclusion)을 계산하였다.
"정상"인혈청 알부민농도(46mg/ml)을 함유한 C 배양액은 VP-16과 VM-26의 CCRF-CEM cell 내의 축적 및 평형농도의 유의적 변화를 일으켰다. Vi와 Css는 B배양액(8mg/ml농도의단백질 함유)과 비교시 C배양액에서 13-26%정도 낮았다.또한 VP-16과 VM-26에 비해 VM-26가 약 10배 4배이상의 높은 Css를 나타냈어다. C배양액에서 VP-16과 VM-26의 단백결합율은 각각 95%-99%이었다. 비록 C 배양액에서 유리약물의 농도가 5%이하이지만 두약물 모두 세포축적은 미약한 반면 세포독성은 유지하였다.
따라서, VP-16과 VM-26는 단백결합 효과면에서 Type Ⅱ의 항암제이다. 앞으로 임상사용중인 항암제와 신항암제의 in vitro단백결합율, 세포내 약물 축적 및 세포독성을 상기와 같은 배양액조건하에 측정하여 단계적으로 비교 연구를 할 필요가 있다.
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