위암에서 중합효소 연쇄반응후 SSCP와 Non-Isotopic RNase Cleavage Assay (NIRCA)를 이용한 P53유전자 변이의 발견
Detection of p53 Gene Mutations in Gastric Cancers -Comparative study of Single Strand Conformational polymorphism migration Technique(SSCP) and Non-Isotopic RNase Cleavage Assay(NIRCA)-
대한암학회지 1997년 29권 2호 p.212 ~ 219
소속 상세정보
김영진
국지연/이지희/김형록/주재환/김동의/김신곤/서순팔/김진복
KMID : 0360319970290020212
Abstract
서론
암의 발생과 진행에는 세포의 성장과 분화에 관여하는 많은 유전자적인 변화가 일어난다
고 알려져 있는데 이를 대별하면 암유전자 활성화와 종양억제 유전자의 불활성화가 있다.
종양억제유전자는 정상 세포 유전자로써 이들이 불활성화되면 세포의 증식에 장애를 초래하
여 암이 발생한다. p53유전자는 17번 염색체의 단완에 위치하는 16∼20kb의 UNA로 11개의
econ으로 이루어져 있고 p53 유전자가 결손되거나 돌연변이에 의한 그기능 상실이 암 발병
의 한가지 요인이라고 생각되고 있다.
p53 유전자의 돌연변이를 검색하는 방법으로는 염기서열 확인법(nucleotide sequencing),
중합효소 연쇄반응-단일가닥구조다형(polymerase chain react-tion-single strand
conformation polymorphism)검사법, 면역조직화학 염색(immunohistochemical staining)등이
있다. 염기서열 확인법은 유전자의 구조이상을 확인하는데 흔히 이용되고 돌연변이의 유무
및 그 양상을 직접 확인할 수 있는 방법이나 시간과 노력이 많이 드는 단점이 있다. 중합효
소연쇄반응-단일가닥구조다형 검사법은 핵산의 구성염기의 차이와 염기서열의 차이에 따라
서 전기영동시 핵산의 이동속도의 차이를 이용하는 방법인데 감수성과 특이성이 높다. 면역
조직화학적인 염색은 돌연변이형 단백질의 반감기가 수시간 혹은 그 이상으로 연장되는 특
성을 이용하여 돌연변이형 p53 단백질을 확인하는 방법인데 감수성과 특이성이 낮다.
연구자들은 위암조직에서 p53 유전자 변이를 중합효소연쇄반응-단일가닥구조다형 검사법,
Non Isotope RNase Cleavage Assay (NIRCA) 방법과 면역조직화학염색의 방법을 이용하
여 이들 검사방법의 장단점을 알아보고, p53유전자의 변이와 환자의 암병기 및 분화도 등과
비교 분석하였다.
#초록#
Purpose : The aim of the present study was: (a) to determine the frequency of p53
mutations by single strand conformational polymorphism analysis of polymerase chain
reaction products (PCR-SSCP), Non-Isotopic RNase Cleavage Assay (NIRCA) and
immunohistochemical staining with monoclonal antibody; and (b) to compare the
correlations among these methods.
Materials and Methods : Abberations of the p53 gene in 24 primary gastric
carcinomas were examined by PCR-SSCP, NIRCA and immunohistochemical staining. Of
these surgically resected gastric adenocarcinomas, 23 were advanced gastric carcinomas
and 1 was early gastric cancer. Using PCR-SSCP and NIRCA, the presence of
mutations in exons 4-9 was evaluated. Using the mouse specific anti-human pf3
monoclonal antibody, we also looked for overexpression of the p53 protein in tissue
sections.
Results : In 5 cases shifted bands were reproducibly identified by PCR-SSCP, and
two mutations were identified in exon 4 and three in 5 & 6. The mutations of econ 4
were detected by NIRCA in 5 cases, exon 5 & 6 in 6 cases, and exon 7 in 2 cases.
The p53 mutations detected by PCR-SSCP were also detected by NIRCA except one
case. Thirteen of the tumor samples were positively stained with the monoclonal
antibody for p53 protein. There was no correlation between p53 mutations detected by
NIRCA and expression of p53 protein by immunohistochemical staining.
Conclusions : Our results in this group of patients suggest that NIRCA is more
sensitive than PCR-SSCP in detecting p53 mutations, and expression of p53 protein by
immu-nohistochemical staining does not directely represent the genetic changes of p53
gene.
키워드
Gastric cancer; p53; PCR-SSCP; Non-Isotopic RNase Cleavage Assay; Immunohistochemical staining;
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