위암 조직에서 Helicobacter pylori Urease A gene의 다형성 분석
Polymorphism Analysis of Helicobacter pylori Urease A Gene in Gastric Cancer Samples
대한암학회지 1997년 29권 3호 p.375 ~ 382
소속 상세정보
이성수/Seong Soo Lee
송남석/박영석/이성수/송남석/박영석/Nam Suck Song/Young Suk Park/Seong Soo Lee/Nam Suck Song/Young Suk Park
KMID : 0360319970290030375
Abstract
서론
rrfirosorfrr pylori(H. pylori)는 1982년 Marshall 과 Warren에 의하여 사람의 위점막 생검
에서 처음 분리 배양되었으며, 현재 이 균과 위, 십이지장 질환의 관련성에 관한 많은 보고
가 있다. 위염의 경우는 약 80%, 위궤양의 경우는 65%, 십이지장궤양의 경우에는 약 100%
가 관련되어 있다고 알려져 있으며 최근에는 H. pylori의 감염이 위암을 발병시키는 위험
인자라고 보고되고 있다. 미국, 호주 등의 선진국의 경우에는 양성율이 20%∼30%이고, 우
리 나라 성인의 경우 80% 이상이 보균자이며 H. pylori는 위생 상태가 좋지 않은 국가에서
양성율이 높다고 알려져 있다. 이 세균의 전파 경로는 구강-구강이거나 대변-구강일 것으로
추정되고 있으며 강물에서 일주일 이상 생존할 수 있어 인체내 보균율이 높은 것으로 판단
되어지고 영유아 시절부터 시작하여 소아 연령에서도 매우 높은 감염 양성율이 보고되고 있
다.
현재까지 사용되고 있는 H. pylori이 진단 방법으로는 배양법, Giemsa 염색법,
enzymelinked immunosorbent assay(ELISA), western blotting, urease 검사법 등이 있으나
각각 검사 방법이 까다롭고 많은 시간을 소요되며 위양성, 위음성 등의 여러 가지 문제점들
때문에 임상에서 흔히 사용하기에는 용이하지 않다. 또한, 이 균의 감염 경로와 재감염 여부
등의 역학적 연구를 위해서 유전적 다양성을 기초로한 형별 구분은 매우 중요한 의의를 갖
는다는 보고가 있다. 이에 저자들은 최근 임상에서 많은 활용이 되고 있는 분자생물학적인
기법인 nested poly-merase chain reaction(PCR)을 이용하여 Giemsa 염색으로 H. Pylori가
확인된 위암의 파라핀 포매 조직으로부터 DNA를 검출하고 nested PCR에 의해 얻어진 산
물을 제한 효소 절편 다형성(restriction fragment length polymorphism; RFLP)을 이용하여
보다 신속하고 간편하게 H. pylori urease A 유전자의 형별 구분을 시도하여 유의한 결과를
얻었기에 보고하는 바이다.
#초록#
Purpose : Several investigators reported the polymerase chain reaction(PCR) method
was more sensitive than culture or other routine laboratory tests for the detection of H.
pylori. In this study, we established the nested PCR method for the sensitive and
specific determination of H. pylori from paraffin-embedded gastric cancer samples, and
the polymorphisms of H. pylori urease A gene were analyzed using by restriction
fragment length polymorphism (RFLP).
Materials and Methods : It was subjected to the nested PCR using two primer pairs
from the urease A gene of r. pylori. The sensitivity of the nested PCR assay was
investigated with serial dilutions of positive DNA of H. pylori. Polymorphisms of H.
pylori were determined by digestion of thirty six PCR positive products with five
different restriction endonuclease-MspI, AluI, DdeI, BstNI, and HinfI.
Results : Amplified H. pylori PCR products were detected to 106 dilutions(10-3 fg) by
nested PCR technique. The polymorphic patterns of five types of H. pylori were found
by MspI, DdeI and AluI. Sequence of type Ⅴ was confirmed by direct sequencing and
the sequences recognized by BstNI and HinfI were conserved regions..
Conclusions : Nested PCR technique is a accurate, sensitive and reliable method for
the laboratory diagnosis of H. pylori infection. Moreover nested PCR-RFLP analysis has
a potential to differentiate H. pylori strains.
키워드
Helicobacter pylori; PCR; RFLP;
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