성상교세포종에서 p53 유전자의 돌연변이 -직접염기서열 결정법에 의한 검색-
p53 Gene Mutations in Astrocytoma -Detection by Direct DNA Sequencing-
대한암학회지 1997년 29권 4호 p.590 ~ 598
최원희, 장우현, 최경찬,
소속 상세정보
최원희 ( )
영남대학교 의과대학 병리학교실
장우현 ( )
서울대학교 의과대학 병리학교실
최경찬 ( )
한림대학교 의과대학 병리학교실
KMID : 0360319970290040590
Abstract
결론
뇌종양에서도 p53 유전자의 돌연변이가 보고된 이래로 신경교종의 진행에 중요한 역할을
하는 것으로 알려져 있으나, 신선 동결조직을 이용한 실험으로는 여러 가지 제한적이었다.
이에 저자는 포르말린에 고정된 10 μm 두께의 파라핀 포매조직을 이용하여 PCR과 직접염
기서열 결정법으로 exon 5∼8번 부위에서 p53 유전자의 돌연변이를 검색하였다.
실험군으로는 조직생검으로 진단된 뇌의 신경교세포종 중 잘 보존된 파라핀 블록 20예를
대상으로 하여, 성상교세포종 10예와 역형성 성상교세포종 10예로 하였다. 정상대조군으로는
외인성 부검환자 중 정상 뇌조직 소견을 보인 10예로 하여 다음과 같은 결과를 얻었다.
p53 유전자의 돌연변이는 역형성 성상교세포종 10예 중 1예(10%)에서 확인되었다. 즉, 역
형성 성상교세포종에서는 2번 예의 exon 7번에서 코돈 245번이 GGC→GAC(Gly→Asp)로
점돌연변이를 보였다. 양성의 성상교세포종 10예와 정상대조군 10예에서는 p53유전자의 돌
연변이가 검색되지 않았다.
이상의 결과를 종합하면 파라핀 포매조직을 이용함으로써 다양한 암종에서 p53 유전자의
돌연변이에 대한 연구가 가능하게 되었고, 본 연구에서 이용한 PCR 및 직접염기서열 결정
법이 유용한 방법으로 사료된다. 향후 더 많은 예의 역형성 성상교세포종 및 교모세포종에
서 p53 유전자의 돌연변이에 대한 검색을 통해, 양성 성상교세포종이 악성으로의 이행 시
p53 유전자의 역할을 규명할 수 있을 것으로 사료된다.
#초록#
Purpose: Mutations in the p53 gene have been recognized in brain tumor, and clonal
expansion of p53 mutant cells has been shown to be associated with glioma progression.
However, studies on the p53 gene have been limited by the need for fresh frozen
tissues. We have tried a method utilizing polymerase chain reaction(PCR) for the direct
DNA sequencing of the p53 gene using a single 10μm paraffin-embedded tissue section.
We applied this method to detect for p53 gene mutations in exons 5∼8 in human
astrocytoma utilizing paraffin-embedded tissues.
Materials and Methods: Twenty paraffin blocks containing tumor were selected from
surgical specimens from twenty different cases. Tumors included 10 astrocytomas and
10 anaplastic astrocytomas. Ten controls were also selected among autopsy cases
showing normal brain in light microscopy. The tissue section on the stained glass slide
was used to guide microdissection of an unstained adjacent tissue section to ensure
above 90% of the tumor cell population for p53 mutational analysis.
Result: Mutation in the p53 gene was identified in 1 of 10(10%) anaplastic
astrocytomas. Mutations in the p53 gene were identified in 1 of 10 cases(10%) by PCR
and direct DNA sequencing. Mutation in exon 7 resulting in amino acid substitution was
found in one anaplastic astrocytoma(codon 245, GGC→GAC: glycine→aspartic acid). Ten
control cases, ten astrocytomas and nine anaplastic astrocytomas were confirmed to be
negative by direct sequencing of amplified DNA.
Conclusion: This study demonstrates the feasibility of evaluating p53 gene mutations
in archived astrocytoma specimens using PCR and direct DNA sequencing on paraffin
sections. Application of this method should facilitate investigation of the role of p53 gene
mutations in tumor biology.
키워드
Anaplastic astrocytoma; p53; Gene mutation; PCR; Direct DNA sequencing;
원문 및 링크아웃 정보
등재저널 정보