세포 전암성 Yes 단백질의 Unique-SH3 Domain과 결합하는 단백 리간드의 검색과 분석
Molecular Screening and Analysis of Ligand Proteins Associating with Unique-SH3 Domain of c-Yes
대한암학회지 1998년 30권 2호 p.394 ~ 401
곽상준, 성연선,
소속 상세정보
곽상준 ( )
단국대학교 치과대학 소아치과학교실
성연선 ( )
단국대학교 의과대학 생화학교실
KMID : 0360319980300020394
Abstract
목적 : 전암성 유전자의 단백질 산물인, c-Yes의 unique-SH3부위를 매개로 하여 결합하
는 리간드 단백질의 cDNA를 분리하고 염기서열을 결정하여 이로부터 유추되는 아미노산
서열로부터 PXXP motif의 공통적인 특징을 규명하고 이와 관련되는 신호전달경로에 대하
여 이해를 높이고자 하였다.
재료 및 방법 : 유전자 재조합 방법으로 c-Yes 단백질의 unique-SH3부위만을 만들었다.
그리고 이를 32P로 표지하고 이를 탐식자로 사용하여 태령 16일의 mouse로부터 제조된
cDNA expression library로부터 단백-단백 결합을 하는 clone들을 얻어 염기서열을 결정하
였다. 이들 중에서 p130Cas와 Kv 1.5내의 PXXP motifs의 유무에 따른 결합
여부를 검사하였고 p130Cas의 경우 면역침전방법으로 Yes와 결합함을 재차
확인하였다.
결과 : 7개의 clone들을 양성으로 판정하여 분석한 결과 그중 2개는 개시부위가 다른 Efs
의 부분 clone들이었다. 다른 2개는 rat APl7의 mouse homologue였으나 이 2개 모두에서
frameshift 돌연변이가 일어나 원래의 단백질에는 없는 PXXP부위가 인공적으로 만들어졌
다. 나머지 3개는 p130Cas, Kv 1.5와 기존에 보고되지 않아 우리가 명명한
Y3B#11이었다. p130Cas와 Kv 1.5에서 PXXP motif의 상실이 우리가 이용한
실험계에서 결합을 소멸시키는 것을 확인하였고 p130Cas와 activated c-Yes
(Y535F)가 함께 면역침전 되는 것이 관찰되었다.
결론 : c-Yes의 SH3부위에 대응하는 리간드의 PXXP motifs의 배열은 class I에 부합하
였고 활성화된 Yes는 p130Cas와 결합하며 이를 매개로 하여 세포 내
adhesion complex와 관련된 신호전달과정에서 Src과 상호 보완적인 기능(redundancy)을 지
닐 가능성이 큰 것을 알게 되었다.
INTRODUCTION
The photo-oncogene c-yes was identified as a cellular homologue of its oncogenic
form (v-yes) found in the genomes of Y73 and Esh avian sarcoma viruses. Its gene
product, p62c-Yes(c-Yes) belongs to Src family proteins that are
characterized by canonical protein domains and their unique arrangement within a
molecule. Many studies have been done on these non-receptor protein tyrosine kinase
family proteins, revealing their involvement in crucial signaling processes responsible for
biological phenomena of significance. The c-Yes has 90% homology in kinase domain
and about 80% homology in SH2 and SH3 domain compared with c-Src and is believed
to associate with cellular membrane structures due to its very N-terminal region of lipid
modification such as myristylation. In mammalian tissues, c-Yes is highly expressed in
neurons of the central nervous system, in platelets, in spermatids, and in a wide variety
of epithelial cell types. While its viral homologue is proven to cause sarcoma and to
transform cells, physiological function of c-Yes is still not clear. Inferred from studies
being done on other Src family proteins, c-Yes seems to take part in signal
transduction implicated in growth and proliferation. As expected from high homology
between c-Yes and c-Src, both kinases share many kinds of substrates in common and
the results of some experiments strongly support functional redundancy among Src
family members. However, considering abnormal bone metabolism observed in c-Src
deficiency, defective long term potentiation in Fyn deficiency and deranged immune
system in Lck deficiency, it is also true that not all the functions of each kinase are
covered up by other members. Even in cell culture system, each kinase responds
differently to certain stimuli of the same kind as opposed to other activities being
shared among family members, fortifying the possibility that each member may
impalement its unique role in addition to biologically crucial functions partly backed up
by familial redundancy. For its survival, eucaryotic cells require elaborate intracellular
signalling networks that coordinate their proliferation, differentiation and metabolism, and
in constructing signal transduction pathways, protein-protein interaction plays a major
role. Therefore seeking physical binders and testing their roles as proteins of biological
significance are exploited as a popular strategy of dissecting signal transduction
pathways related to the protein of interest.
키워드
Proto-oncogene; Yes; SH3 domain; Proline-rich region;
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