한국인의 간암에서 형광-PCR법을 이용한 Microsatellite Instability의 분석
Microsatellite Instability in Korean Hepatocellular Carcinoma using Fluorescent-PCR
대한암학회지 1998년 30권 3호 p.544 ~ 552
소속 상세정보
박영석/Young-Suk Park
왕희정/오문주/김은하/이경옥/김명욱/채영규/박영석/Hee-Jung Wang/Moon-Ju Oh/Eun-Ha Kim/Kyung-Ok Lee/Myung-Wook Kim/Young-Gyu Chai/Young-Suk Park
KMID : 0360319980300030544
Abstract
서론
원발성 간암 (primary hepatocellular carcinoma)은 아시아와 아프리카에서 가장 많이 나
타나는 암으로, 한국인에 있어서 남성의 경우 위암 다음으로 높게 나타나고 있으며, 여성의
경우는 부인암을 제외하면 위암, 대장암 다음으로 발병한다. 일반적으로 간암 발생의 중요
위험인자로써 B형 간염 바이러스 (HBV), C형 간염 바이러스 (HCV) 등과 같이 간염 바이
러스에 의한 원인이 가장 높으며, 이 밖에 aflatoxin B1에 감염된 음식물의 섭취, alcohol의
남용, 유전적 요인 등이 경우가 있다. 주로 암 발생에 대한 분자생물학적 변화는 암유전자와
암억제 유전자 사이의 단계적 유전자 변화에 의한 것으로 알려져 있다. 즉 암유전자가 활성
화되거나 암억제 유전자가 불활성화되면 이들간의 균형을 상실하게 되어 비정상적인 세포의
성장을 촉진하는 것이다. 또한 암형성은 정상세포의 유사분열과 apoptosis (programmed
cell death) 사이의 불균형에 의한 것임을 나타내는 연구가 되고 있으나, 아직까지 간암 형
성에 있어 간염 바이러스의 역할과 분자생물학적 단계에서의 기전은 완전히 알려지지 않고
있다.
Microsatellite는 짧고 (2-5 base pairs) 반복적인 (보통 15∼30번) DNA 염기서열로 전 염
색체에 고루 분포되어 있으며, 이것을 이용하여 유전자 연관관계 분석이나 대립유전자 손실
등을 분석하는데 사용을 하고 있다. 일반적으로 2 bp (CA repeats)의 반복에 의한
microsatellite는 100,000 bp 마다 한번씩 일어나며, 이들의 반복단위는 개인에 따라 유전자
다형성을 나타낸다. 이 microsatellite를 분석할 때 정상조직과 비정상조직에서 다른 형태의
유전자 다형성을 나타내는 것을 microsatellite instability (MSI)라고 한다. MSI의 원인은
DNA mismatch repair유전자에 이상이 발생하여 DNA 복제시 발생하는 단순한 오류를 수
정하지 못하기 때문에 일어나는 것으로, 현재 사람에게 있어 hMSH2, hMLH1, hPMS1과
hPMS2 등의 mismatch repair 유전자가 알려져 있다. 이 MSI와 암과의 상관관계에 대한 연
구가 1993년 Aaltonen등에 의해 hereditary non-polyposis colorectal cancer (HNPCC)에서
보고된 이후에 대장암, 위암, 전립선암, 간암, 자궁내막암, 결장직장암, 난소암, 백혈병 등 많
은 암에서 연구되고 있다.
일반적으로 PCR을 이용한 MSI의 분석은 방사선 동위원소와 urea-polyacrylamide gel을
이용하고 있으나 이 방법은 시간 소요가 많고 방사능 사용 등의 문제점이 있어, 최근에는
형광으로 표식된 primer를 이용한 형광-PCR법이 이용되고 있다. 이에 저자들은 형광-PCR
(fluorescent-PCR)법과 자동 DNA 분석기를 사용하여, 한국인의 간암으로부터 apoptosis와
관련된 5개의 유전자 waf1(cip1; p21), Rbl, p53, bcl-2 및 bax 등에서 microsatellite를 증폭
하고 이들과 MSI의 상관관계를 분석하여 보았다.
Purpose : Hepatocellular carcinoma (HCC) is one of the most common cancers in
many parts of the world, however the molecular mechanisms underlying liver cell
transformation remain obscure. The instability of microsatellite sequences dispersed in
the genome has been linked to a deficiency in cellular mismatch repair. This phenotype
has been frequently observed in various human neoplasms and is regarded as a major
factor in tumorigenesis. To investigate cumulative genetic changes related with apoptosis
during development and progression of HCC, we examined DNAs isolated from 12
Korean HCCs and their adjacent non-tumorous parts to look for evidence of
microsatellite instability (MSI).
Materials and Methods : Twelve microsatellite loci (D6S271, D6S426, D13S153,
D13S263, D17S849, D17S938, D17S945, D18S474, D18S64, D19S420, D19S418 and
D19S210) were amplified by PCR from 12 Korean HCCs, and analyzed using an
automated DNA analyzer.
Results : The high percentages of the MSI were found for the loci of D6S426 (33.3%)
and D17S945 (25.0%). The related genes with high frequency of MSI were noted in the
waf1 (41.7%) and p53 (25.0%). From this study, fifty eight percent of HCCs (7/12)
showed MSI with at least one marker.
Conclusion : This results suggest that the analysis of MSI in HCC might be useful
for identifying genes whose loss of function contributes to the development of liver
cancer. Furthermore, this method may give a more rapid and accurate sizing of the PCR
products of microsatellite, making the routine assessment of MSI possible in many
clinical fields.
키워드
Hepatocellular carcinoma (HCC); Microsatellite instability (MSI); fluorescent-PCR;
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