MCF-7 유방암 세포에 있어서 α-difluoromethylornithine의 단백질 인산화 억제 효과
Alfa-difluoromethylornithine Reduces Protein Phosphorylation in MCF-7 Human Breast Cancer Cells
대한암학회지 1999년 31권 5호 p.1044 ~ 1053
이지영, 김병기,
소속 상세정보
이지영 ( )
부산대학교 의과대학 소아과학교실
김병기 ( )
부산대학교 의과대학 소아과학교실
KMID : 0360319990310051044
Abstract
kabstract :
목적 : MCF-7 유방암 세포에 있어서 에스트로겐과 펩티드 성장인자인 TGF-α는 다양한 신호전달기
작에 따른 단백질 인산화를 통하여 세포증식을 유도한다. 최근 유방암 치료제로 연구·개발되고 있는
α-difluoromethylornithine이 세포증식 신호전달기작에 따른 단백질 인산화에 어떤 영향을 미치는지를
연구하였다.
재료 및 방법 : MCF-7 세포는 phenol red가 없는 Dulbecco's modified Eagle 배지(DMEM)에서 5%
의 CO2와 37℃의 온도에서 배양되었으며, in vitro 인산화 반응을 위하여서는 10μCi의
[γ-32P]ATP를 50 μg의 세포 현탁액 또는 세포막 분획에 첨가하여 1분간 반응시켰다.
인산화된 단백질 분석을 위해서는 동일한 양의 단백질을 SDS-전기영동한 후, FLA-2000 image
analysis system을 이용하여 정량분석하였다.
결과 : 에스트로겐 처리시, 에스트로겐 수용체(ER)인 67 kDa을 비롯한 125, 104, 51, 48, 42, 14 kDa
등의 단백질들의 인산화가 5분에서 1시간에 걸쳐 점차적으로 증대되었다. ER의 최고치 인산화 반응은
30분 배양에서 2.5배로 증대되었으며 4시간 동안의 배양에서는 ER을 위시한 대부분 단백질의 인산화가
감소되었다. TGF-α를 처리한 경우에도 E2 처리시와 유사한 단백질 인산화 촉진 효과가
나타났으며, 이 때의 신호전달과정에서 일어나는 단백질 인산화에는 PKA, PKC, 및
Ca+2/calmodulin-의존 PK가 간접적으로 관여하는 것으로 관찰되었다. 폴리아민 대사의
주된 효소인 omithine decarboxylase의 특이적 대사억제제인 α-difluoromethylornithine (DFMO)는
3mM 농도에서 E2와 TGF-α에 의하여 촉진된 단백질들의 인산화를 심하게 억제하였다.
3 mM의 DFMO를 5분간 처리한 세포현탁액에서 ER과 104 kDa 단백질의 인산화는 극심하게 저해되었
으나, 35 kDa 단백질의 인산화는 오히려 증대되었다. 막단백질의 인산화 유도반응에서도 DFMO는 막특
이단백질인 43.8과 31 kDa 단백질을 비롯한 여러 종류의 단백질 인산화에 심한 억제 효과를 나타내었
다.
결론 : MCF-7 세포에 에스트로겐 처리시, 에스트로겐 수용체인 67 kDa 단백질의 인산화는 시간 의
존적으로 증대되었다. 에스트로겐에 의하여 인산화가 촉진된 많은 단백질들은 TGE-α에 의하여서도 비
슷한 양상으로 인산화가 촉진되었다. 이들 단백질들의 인산화 과정은 세포내 폴리아민 합성을 억제하여
증식을 저해하는 DFMO에 의하여 특이적으로 억제되었으며, 이러한 사실은 폴리아민이 단백질 인산화
과정의 조절을 통하여 호르몬이나 성장인자의 자극에 의한 세포증식과정에 중요한 역할을 한다는 것을
간접적으로 시사한다.
키워드
MCF-7 cell; Estrogen; TGF-α; DFMO; Polyamines;
원문 및 링크아웃 정보
등재저널 정보