초파리 배양세포에서 Adenine Nucleotide Translocase 과발현에 의한 세포사멸유도에 관한 연구
Overexpression of Adenine Nucleotide Translocase Induces Apoptosis in Drosophila Cultured Cell
신명주, 박소영, 유미애,
소속 상세정보
신명주 ( Shin Myoung-Joo )
부산대학교 분자생물학과
박소영 ( Park So-Young )
부산대학교 분자생물학과
유미애 ( Yoo Mi-Ae )
부산대학교 분자생물학과
KMID : 0603520030080030166
Abstract
Adenine nucteotide translocase (ANT)늘 미토콘드리아의 permeability transition pore(MPTP)의 주요한 요소이며, 미토콘드리아 내막 안음으로 ADPfATP exchan避를 담당한다. 최근 보고에 따르면, 포유동물에서 ANT는 Bax를 매개로 하는 세포사멸에 요구되는것으로 알려져 있다. 그러나 초파리에서 ANT기능에 관한 연구는 거의 알려져 있지 않다. 초파리의 ANT 유전자는 염색체상에 이중으로 나란히 배열되어 었므며, 각각 sesB와Ant2로 명명하고 있다. 본 연구에서는 초파리 유전자의 기능연구에 유용한 시스템인GAL4-UAS 시스템을 사용하여 초파리 배양 세포에서 sesB와 Ant2의 기능을 조사하였다. 플라스미드 PUAST-sesB와 PUAST-An證을 제작하였고, 이들을 초파리 Kc 세포에´ pAc-GAL4 플라스띠드와 함께 transfection하여 RT-PCR로 sesB와 h:iRla의 과발현을 확인하였다. 세포사멸의 정도에 따라 다르게 염색하는 시약인 아코리딘 오렌지(adineorange)를 사용하여 sesB 또는 hnt2를 과발현시킨 제포와 그렇지 않은 세포를 염색하였다. 그 결과 정상세포에 비해 sesB 또는 Arlt2를 과발현시컨 세포에서 세포사멸이 증가함이 관찰되었다. 이러한 결과는 초파리 ANT의 과발현이 세포사멸을 유도함을 나타내며,Af帶 유전자의 발현이상이 세포사멸과 관련이 있음을 시사하고 있다.
The adenine nucleotide translocase (ANT) is a major component of mitochondrial permeability transition pore (MPTP) and catalyzes the exchange of adenine nucleotides across the mitochondrial inner membrane. It has recently been known that ANT is required for apoptosis mediated by Bax in mammal. However, in Drosophila, the study of ANT function is rarely known. The Drosophila ANT genes are duplicated tandemly, sesB and Ant2 respectively. In this study, using a GAL4-UAS system, we investigated the gain-of-function of sesB and Ant2 gene in Drosophila Kc cells. We confirmed overexpression of sesB and Ant2 gene in Drosophila Kc cell transiently transfected with the constructed plasmids pUAST-sesB or pUAST-Ant2, and pAc-GAL4 through RT-PCR. Subsequently, we observed apoptosis in Drosophila cultured cells transfected with the plasmid pAc-GAL4/pUAST-sesB or pAc-GAL4/pUAST-Ant2. The present results indicate that Drosophila ANT overexpression lead to apoptosis and suggest that dysregulation of ANT expression may be also associated with apoptosis.
키워드
세포사멸;GAL4-UAS 시스템;초파리 배양세포
Adenine nucleotide translocase(ANT);Apoptosis;GAL4-UAS system;Drosophila cultured cell;Adenine nuclcotide translocase(ANT)
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