HCT116 세포에서 FBXL-6 유전자에 의한 E2F 전사 활성 조절
Regulation of E2F-mediated Transcription by FBXL-6 in HCT116 Cell
김지태, 임미정, 유미애, 김규원, 염영일,
소속 상세정보
김지태 ( Kim Ji-Tae )
부산대학교 분자생물학과
임미정 ( Lim Mi-Jung )
한국생명공학연구원
유미애 ( Yoo Mi-Ae )
부산대학교 분자생물학과
김규원 ( Kim Kyu-Won )
서울대학교 약학대학
염영일 ( Yeom Young-Il )
한국생명공학연구원 유전체연구단
KMID : 0603520030080040267
Abstract
F-box protein은 駱pip-Cultin-F-box protein (SCF) complex의 구성 요소로써 ubiquitin-dependentp「oteolis과정 증 분해될 기질의 인식작용에 중추적 역할을 수행한다. 일부F-box protein들은 cyclin 5, p27 등과 같은 주요 cell cycle 조절자의 분해에 관련되어 있다고 알려져 있다. 본 연구에서는 유전자 동정에 대한 보고만 있을 뿐 상위 혹은 하위 유전자와의 구체적민 판계 및 그 작용기전에 대한 연구가 전무한 F-box and leucine-rich repeatprotein 6 (FB:亂-6)가 세포 성장 조절의 중추적 전사인자인 E2F의 활성 조절에 미치는영향에 대하여 조사하였다. 5´말단 부위의 일부 염기서열이 결여된 FBXL-6유전자를내재적 E2F전사 활성이 억제되어 있는 대장암 세포주 HCTl16에서 과발현시킨 경우E2F의 활성이 유의하게 증가됨을 확인하였다. RT-PCR 분석에 의하면 fBXL-6의 irIRNA는 거의 모든 암세포에서 발현됨을 관찰하였다. 또한 full-length발현 벡터를 사웅하여班CTl16 대장암 세포와 간암 및 위암 제포에서 猛2f 전사 활성예 대한 fBB긴-6 유전자의과발현에 따르는 효과를 조사한 결과, 대부분의 암세포에서 E2F 전사활성이 종가됨을거듭 확인하였다. 이상의 결과로 볼 때 fBXL-6 유전자는 대부분의 세포에서 발현되며,과발현 시 세포 내에서의 E2F 전사 활성을 증가시킬 수 있음이 확인되었다. 이것은FBXL-6 유전자가 E2F pa凍way상의 어떤 단백질에 대한 Post-translational Bna절ification을통해 그 활성이하 안정성을 조절할 가능성이 있음을 시사하는 결과라 할 수 있다.
F-box proteins are components of Skplp-Cullin-F-box protein (SCF) ubiquitin-ligase complexes, where they mediate the critical step of substrate recognition. Some of the F-box proteins are responsible for selective degradation of cell cycle regulators. The F-box and leucine-rich repeat protein 6 (FBXL-6), an isoform of F-box protein family, has been cloned but its functions are barely known. In this report we examined the effect of FBXL-6 on the E2F-mediated transcription in HCT 116 colorectal cancer cells. First, we found through transient transfection of E2F-responsive reporter vectors that the E2F activity is significantly repressed in HCT116 cells. Forced expression of 5´-truncated FBXL-6 in these cells could help the repression relieved and increase the E2F-mediated transcriptional activity. RT-PCR analysis revealed that the FBXL-6 mRNA is expressed in most of the cancer cells at varying degrees. We then confirmed, using a full-length cDNA expression vector, that FBXL-6 could augment the E2F-mediated transcription in various other cancer cell lines originated from hepatocellular, gastric or colorectal cancers. These results suggest the possibility that FBXL-6 may regulate the activity or stability of a protein constituting the E2F pathway via a post-translational modification.
키워드
E2F 전사인자;F-box 단백질;FBXL-6;HCT116 세포주
E2F transcription factor;F-box protein;FBXL-6;HCT116 cells
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