피부 섬유모세포 노화에 따른 세포집락 크기의 분포
Colony Size Distributions according to in vitro Aging in Human Skin Fibroblasts
소속 상세정보
김준상/Jun Sang Kim
김재성/조문준/박정규/백태현/Jae Sung Kim/Moon June Cho/Jeong Kyu Park/Tae Hyun Paik
KMID : 0859319990170020158
Abstract
목 적 : 유방암 환자의 피부 섬유모세포를 이용한 in vitro 배양 실험을 통하여 16 세포집
락 비율 분포의 변화를 관찰하여 16 세포집락 비율과 in vitro 세포 노화 및 섬유모세포 공
여자의 in vitro 연령과의 연관성을 조사하고자 하였다.
대상 및 방법 : 유방암 수술을 받은 3명의 환자로부터 얻은 유방 부위 피부를 본 실험 대
상으로 사용하였다. 각 환자의 유방 부위 피부로부터 얻은 피부 섬유모세포 표본의 명칭을
C1, C2, C3a 및 C3b로 분류하였으며 각 표본 공여자의 연령은 C1이 44세, C2는 54세, 그리
고 C3a 및 C3b는 동일한 공여자로서 연령은 55세였다. 피부 섬유모세포의 단일 세포 부유
액은 일차조직 배양법으로 얻었으며 100 개의 세포들을 100㎖ 의 조직배양 flask에 분주 후
37℃에서 2주 동안 배양하였다. 5개의 flask에서 배양한 피부 섬유모세포의 16 세포집락 비
율을 알기 위하여 crystal violets으로 염색한 후 10 배율의 입체 현미경을 이용하여 16개
세포 이상으로 구성된 세포집락 수를 1개 이상으로 구성된 세포 집락수로 나눈 수치를 16
세포집락 비율로 나타내었으며 각각 5개의 flask에서 얻어진 16 세포집락 비율 평균치를 각
계대배양에 대한 16 세포집락 비율로 나타내었다. C1, C2의 계대배양 횟수는 각각 12회, 17
회 였으며 C3a와 C3b는 14회 계대배양 하였다.
결 과 : C1, C2, C3a 및 C3b 피부 섬유모세포 모두에서 16 세포집락 비율이 계대배양 횟
수의 증가에 따라 감소하는 경향을 보였으며, 집단이배화증가에 따라 감소하였다. 그리고 계
대배양 횟수가 증가함에 따라 집단이배화가 증가되는 것이 관찰되었으며 특히 C3a 섬유모
세포의 상관계수가 0.954(p=0.0001)로서 가장 강한 상관관계가 있음을 보였다. 동일한 지점
의 집단이배화에서 16 세포집락 비율이 고연령 자인 C3a 공여자보다 저연령자인 C1 공여자
에서 더 높게 나타났다.
결 론 : 사람 피부 섬유모세포의 in vitro 배양에서 계대배양 횟수의 증가에 따라 집단이
배화는 증가되고, 세포 노화로 인해 16 세포집락 비율은 감소되는 것을 알 수 있었다. 또한
저연령의 피부 섬유모세포일수록 집단이배화 증가에 따른 16 세포집락 비율 감소가 고연령
의 경우보다 완만하였다. 따라서 피부 섬유모세포 in vitro 배양에서 관찰되는 16 세포집락
비율은 in vitro 세포 노화의 지표로서 유용하며 또한 피부 섬유모세포 공여자의 연령 평가
에 이용될 수 있을 것으로 사료된다.
Purpose : To investigate the percentage of colonies with 16 or more cells distribution
of human skin fibroblast according to in vitro aging, and to evaluate the relationship
between percentage of colonies with 16 or more cells and 1'n vivo donor age in human
skin fibroblast culture.
Material and Method : C1, C2, C3a, and C3b human skin fibroblast samples from three
breast cancer patients were used as subjects. The C1, C2, and C3a donor were 44, 54,
and 55 years old, respectively. C3a and C3b cells were isolated from the same person.
Single cell suspension of skin fibroblasts was prepared with primary explant technique.
One hundred cells are plated into 100㎖ tissue culture flask and cultured for two weeks.
The colony size was defined as colonies with 16 or more cells. The cultured cell was
stained with crystal violet, and number of cells in each colony was determined with
stereo microscope at ×10 magnification. Passage number of C1, C2, C3a and C3b skin
fibroblast were 12th, 17th, and 14th, respectively.
Results : Percentage of colonies with 16 or more cells of skin fibroblast samples
decreased with increasing in vitro passage number. In contrast, cumulative population
doublings of skin fibroblast sample increased with increasing in vitro passage number.
Percentage of colonies with 16 or more cells also decreased with increasing population
doublings in human skin fibroblast culture. There was strong correlation with percentage
of colonies with 16 or more cells and population doublings in C3a skin fibroblast sample.
At the same point of population doublings, the percentage of colonies with 16 or more
cells of the young C1 donor was higher level than the old C3a donor.
Conclusion : The population doublings increased with increasing in vitro passage
number but percentage of colonies with 16 or more cells decreased. The results of this
study imply that percentage of colonies with 16 or more cells is useful as a indicator of
in vitro human skin fibroblast aging and may estimate the in vivo donor age.
키워드
사람 피부 섬유모세포; In Vitro 노화; 세포집락크기; Human skin fibroblast; In vitro aging; Colony size;
원문 및 링크아웃 정보
등재저널 정보