쥐의 폐에서 방사선이 Nitric Oxide (NO), Nitric Oxide Synthase (NOS) 및 TGF-β의 발현에 미치는 영향
Radiation Effect on NO, NOS and TGF-βExpressions In Rat Lung
소속 상세정보
오영택/Young-Taek Oh
박광주/길훈종/하만준/전미선/강승희/박성은/장세경/Kwang-Joo Park/Hoon-Jong Kil/Mahn Joon Ha/Mison Chun/Seung-Hee Kang/Seong-Eun Park/Sei-Kyung Chang
KMID : 0859320000180040321
Abstract
목적: 방사선폐렴에서 NO가 염증반응을 매개하는 물질로 보고되고 있는데. 이때 유도형의 Nitric Oxide Synthase 2(NOS2) 가 주로 Nitric Oxide(NO) 생성에 관여하는 것으로 알려져 있다. 이 NOS2의 억제조절물질로 TGF-β가 알려져 있으며, 최근에는 NO가 증가하면
TGF-β의 활성이 증가하고 그에 따라 NOS2가 억제되어 NO의 생성이 억제되는 간섭기전(feedback mechanism)이 보고되어있다. In vivo 동물모델에서 방사선조사 후에 NOS2 발현 및 NO 생성의 변화를 측정하고, 그에 따라 TGF-β가 어떻게 변하는지를 관찰하고자 본
연구를
진행하였다.
대상 및 방법: Sprague-Dawley 쥐 60마리를 마취 후 5 Gy와 20 Gy의 방사선을 우측 폐에
조사하고 대조군은 위 조사를 시행하였다. 방사선조사 후 3일, 7일, 14일, 28일, 56일에 방사
선 조사군(5 Gy, 20Gy)각 5마리와 대조군 2마리를 희생시키고, 희생시키기 전에 우측 폐와
좌측 폐의 주기관지에서 각각 폐포 세척을 시행하여 폐포 세척액을 얻었다. 폐포 세척액에
서 단백질과 세포 수를 측정한 후 원심 분리하여 상층액은 NO와 TGF-β 단백의 양을 측
정하는데, 가라앉은 폐포 대식세포는 TGF-β와 NOS2 mRNA의 RT-PCR을 위한 검체로
사용하였다.
결과: 방사선조사 후 5 Gy군에서는 NOS2 mRNA가 14일 째에 우측 폐에서 발현하였고, 28
일 째에는 양쪽 폐에서, 56일 째에는 좌측 폐에서 증가하였다. TGF-β mRNA는 계속 발현
되었으나 28일 째에 발현이 감소하는 양상이었고 56일에는 좌측 폐에서 증가하였다. 폐포세
척액내의 NO는 28일 째 증가하였고, TGF-beta 단백의 양이 56일 째 좌측 폐에서 증가하였
다. 20 Gy 군에서는 NOS2 mRNA는 5Gy와 마찬가지로 14일주 째에 우측 폐에서 발현하여
28일주째에 양쪽 폐에서 발현하고 56일 째에 양쪽 폐에서 강하게 발현하였다. TGF-β
mRNA 는 28일 째에 우측 폐에서 56일 째에 양측 폐에서 증가하였다. 폐포 세척액 내의
NO의 양은 28일 째에 양쪽 폐에서 증가하였고, TGF-β 단백의 양은 우측 폐에서 28일 째
정점을 이루고, 56일 째에 좌측 폐에 비해 유의한 증가 양상을 보여주었다.
결론: 방사선폐렴의 동물모델에서 NO, NOS2 와 TGF-β는 선량에 따라 약간의 차이가 있
었지만 14일 째 우측 폐에서의 NOS2 mRNA의 발현을 시작으로 비교적 일관된 발현 양상
을 보여 주었고 그에 따라 폐포세척액 내의 NO 및 TGF-β 단백의 양이 변하였다. 그러나
예상과는 달리 56일 째에는 NOS2와 TGF-β가 모두 발현하여, 좀 더 많은 개체 수를 대상
으로 장기간을 통해 발현 양상을 관찰할 필요성이 있으며, 이 연구를 바탕으로 NOS2억제제
를 사용하여 TGF-β의 발현 양상에 어떤 변화가 오는지에 대한 연구가 필요하다고 평가되
었다.
Purpose: NOS2 induce No production and NO activate TGF-β. The TGF-β is a inhibitor of NOS2. If this negative feedback mechanism operating in radiation pneumonitis model, NOS2 inhibitor may play a role in TGF-β suppression. We planned this
study
to
evaluate the expression patterns of NO, NOS2 and TGF-β in vivo radiation pneumonitis model.
Materials and Methods: Sixty sprague-Dawley art were irradiated 5 Gy or 20 Gy. They
were sacrificed 3, 7, 14, 28 and 56 days after irradiation. During sacrifice, we performed
broncho-alveolar lavage (BAL). The BAL fluids were centrifuged and supernatents were
used for measure NO and TGF-β, and the cells were used for RT-PCR.
Results: After 5 Gy of radiation, NO in BAL fluid increased at 28 days in both lung
and TGF-β in left lung at 56 days. NO increased in BAL fluid at 28 days in both lung
after irradiation and TGF-β in right lung at 28-56 days after 20 Gy of radiation. After
5 Gy of radiation, NOS2 expression was increased in right lung at 14 days, in both lung
at 28 days and in left lung at 56 days. TGF-βexpression was reduced in both lung at
28 days and increased I left lung at 56 days.
Conclusions: The proposed feedback mechanism of NO, NOS2 and TGF-β was operated
in vivo radiation pneumonitis model. At 56 days, however, NOS2 and TGF-β expressed
concurrently in left lung after 5 Gy and in both lung after 20 Gy of radiation.
키워드
방사선폐렴; Nitric Oxide; Nitric Oxide Synthase 2; TGF-β; 방사선; Radiation pneumonitis; NO; NOS2; TGF-β; Radiation;
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