인체 대장암 세포주(HT-29)에서 담즙산 합성유도체(HS-1200)의 세포 사망 기전
A Novel Chenodeoxycholic Derivative HS-1200 Induces Apoptosis in Human HT-29 Colon Cancer Cells
소속 상세정보
오신근/Sin Geun Oh
양광모/허원주/유영현/서홍석/이형식/Kwang Mo Yang/Won Joo Hur/Young Hyun Yoo/Hong Suk Suh/Hyung Sik Lee
KMID : 0859320020200040367
Abstract
목적: 인체 대장암 세포주인 HT-29에 새로운 CDCA 합성유도체인 HS-1200을 처치하여 암세포의 증식에 미치는 영향과 아포토시스 유도 활성을 관찰하고 기전을 연구하고자 하였다.
대상 및 방법: 지수증식기의 HT-29 세포에 다양한 농도의 CDCA 합성유도체인 HS-1200을 투약하여 IC50를 구하였다. IC50의 농도를 참조하여, 세포 생존능의 실험은 trypan blue exclusion assay를 이용하였고, 아포토시스 유도에 관한
관찰
실험은 agarose gel electrophoresis, TUNEL assay 및 Hoechst staining을 이용하였다. Western blotting을 통한 PARP [poly (ADP-ribose) polymerase], caspase-3 및 DFF (DNA fragmentation factor)의 degradation 및 cleavage 등을 관찰하였다.
Immunofluorescent
method를 통한 cytochrome c 방출 측정 및 미토콘드리아 막전위 측정을 실시하였다.
결과: HS-1200은 agarose gel electrophoresis 실험에서 DNA ladder의 관찰, TUNEL assay 및 Hoechst staining 에서 아포토시스 세포들이 대량으로 관찰되는 결과로 미루어 아포토시스에 의한 세포 사망을 유도하는 것으로 사료되었다. 아포토시스에 의한
세포
사망을 검증하기 위한 Western blotting을 통한 PARP cleavage, caspase-3 및 DFF 발현 관찰에서 공히 HS-1200 처치 후 4시간 째부터 PARP, caspase-3 및 DFF의 degradation 및 cleavage가 관찰되었다. HS-1200의 아포토시스 유도에 이르는 기전연구에서
미토콘드리아의
역할에 주목하고 시행한 cytochrome c 방출 측정 및 미토콘드리아막 전위 (ΔΨm) 측정에서 공히 cytochrome c 방출 및 미토콘드리아막 전위 (ΔΨm)의 감소가 관찰되었다.
결론: 인체 대장암 세포주(HT-29)에서 CDCA 합성유도체인 HS-1200을 이용한 세포 증식억제 및 세포 사망 기전 연구에서, 아포토시스의 유도가 HS-1200의 세포 사망 기전에 중요한 역할을 하는 것을 확인하였다. 이러한 아포토시스의 유도에는 미토콘드리아의
역할이
중요하게 관련되는 것으로 관찰되었다. 상기 결과를 토대로 HS-1200의 항암 치료제로서의 역할에 관한 기초 자료로서의 유용성을 제시할 수 있었다.
Purpose: To investigate the growth inhibitory effects, and the underlying mechanism of human colon cancer cell (HT-29) death, induced by a new synthetic bile acid derivative (HS-1200).
Materials and Methods: Human colon cancer cells (HT-29), in exponential growth phase, were treated with various concentrations of a new synthetic bile acid derivative (HS-1200). The growth inhibitory effects on HT-29 cells were examined
using a
trypan blue exclusion assay. The extent of apoptosis was determined using agarose gel electrophoresis, TUNEL assays and Hoechst staining. The apoptotic cell death was also confirmed by Western blotting of PARP, caspase-3 and DNA fragmentation
factor
(DFF) analysis. To investigate the involvement of mitochondria, we employed immunofluorescent staining of cytochrome c and mitochondrial membrane potential analyses.
Results: The dose required for the half maximal inhibition (IC50) of the HT-29 cell growth was 100~150 ㎛ of HS-1200. Several changes, associated with the apoptosis of the HT-29 cells, were reveal by the agarose gel
eletrophoresis,
TUNEL assays and Hoechst staining, following their treatment with 100 ㎛ of HS-1200. HS-1200 treatment also induced caspase-3, PARP and DFF degradations, and the western blotting showed the processed caspase-3 p20, PARP p85 and DFF p30 and p11
cleaved
products. Mitochondrial events were also demonstrated. The cytochrome c staining indicated that cytochrome c had been released from the mitochondria in the HS-1200 treated cells. The mitochondrial membrane potential (ΔΨm) was also
prominently decreased in the HS-1200 treated cells.
Conclusion: These findings suggest that the HS-1200 - induced apoptosis of human colon cancer cells (HT-29) is mediated via caspase and mitochondrial pathways.
키워드
인체 대장암 세포주(HT-29); 담즙산 합성유도체(HS-1200); 아포토시스; Bile acids; CDCA derivatives-induced apoptosis; Mitochondrial pathway;
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